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細(xì)胞凍存——保存細(xì)胞的主要方法
細(xì)胞凍存是將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,這樣可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,以便需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件丟失細(xì)胞,起到了細(xì)胞保種的作用。
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原理是慢凍快融,利用這一原理可以大限度的保存細(xì)胞活力。
凍存的原理——慢凍:主要是防止細(xì)胞在冷凍過程中形成冰晶,對細(xì)胞造成損害;
復(fù)蘇細(xì)胞的原理——快融:主要是防止DMSO在液體狀態(tài)下對細(xì)胞的毒害作用,快速使細(xì)胞進(jìn)入復(fù)蘇和生長狀態(tài);
當(dāng)細(xì)胞冷到零度以下,細(xì)胞器脫水,細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶。如果緩慢冷凍,可使細(xì)胞逐步脫水,細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶;相反,結(jié)晶就大,大結(jié)晶會(huì)造成細(xì)胞膜、細(xì)胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過程應(yīng)快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重結(jié)晶。
注意事項(xiàng):
1、從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存,但為對數(shù)生長期細(xì)胞。在凍存前一天換一次培養(yǎng)液;
2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時(shí),要做好防護(hù)工作,以免凍傷;
3、凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。
4、取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡。此項(xiàng)特別重要,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。