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人眼結(jié)膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)和細(xì)胞保存的佳方法,建立人結(jié)膜上皮細(xì)胞系,進(jìn)一步研究人結(jié)膜的病理、生理特點(diǎn)及為毒理試驗(yàn)提供可靠的細(xì)胞模型。
方法:分別用組織塊培養(yǎng)法、機(jī)械分離法及混合消化液培養(yǎng)法體外培養(yǎng)正常成年人結(jié)膜上皮細(xì)胞,通過觀察細(xì)胞形態(tài)、生長特性并用原位免疫組化方法鑒定培養(yǎng)細(xì)胞;收集第3代和第4代融合的細(xì)胞液氮罐凍存,保存30天后復(fù)蘇,觀察復(fù)蘇成功率。
這3種取材方法中,混合消化液培養(yǎng)法細(xì)胞生長繁殖較快,培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)多樣,貼壁生長。免疫組化染色陽性,細(xì)胞凍存復(fù)蘇的成功率均達(dá)到90%。組織塊培養(yǎng)法細(xì)胞生長比較緩慢,而機(jī)械分離法細(xì)胞未見貼壁生長。
混合消化液培養(yǎng)法是人結(jié)膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)的佳方法,通過液氮罐凍存可保存培養(yǎng)的人結(jié)膜上皮細(xì)胞。